Clonaje y marcadores de peso molecular de ADN
Las herramientas que modifican los ácidos nucleicos constituyen la base de muchas técnicas de biología molecular, como el subclonaje. Para el clonaje convencional de fragmentos de ADN, disponemos de una gran variedad de enzimas de restricción y ADN ligasa T4. Para la transformación bacteriana ofrecemos una selección de células competentes, incluida nuestra cepa exclusiva Single Step KRX.
Para otras aplicaciones de clonaje disponemos de ADN quinasa T4, fosfatasa alcalina de ternera y otras enzimas modificadoras. Para la transcripción de ARN, disponemos de ARN polimerasas T7, SP6 y T3.
Nuestra gama de marcadores de peso molecular de ADN/ARN incluye marcadores bench top y step ladders que le permitirán confirmar el éxito de un experimento.
Grupos de productos de clonaje y marcadores de peso molecular de ADN
Cepas bacterianas y células competentes
Células competentes listas para la transformación así como stocks de E. coli en glicerol.
Vectores y kits para el clonaje
Incluye una serie de vectores para el clonaje y subclonaje, y los prácticos Flexi® Cloning Systems para la expresión de proteínas.
Marcadores de peso molecular
Marcadores de peso molecular de ADN de diferentes tamaños y formatos, incluidos marcadores benchtop y step ladders. Incluye marcadores de peso molecular de ARN y de proteínas.
Enzimas y reactivos de biología molecular
Encuentra ligasas, polimerasas, PNK, fosfatasas, nucleasas y mucho más.
Enzimas de restricción
Enzimas de calidad y de rendimiento testado para sus necesidades habituales de clonaje.
Los mejores productos de clonaje y marcadores de peso molecular de ADN para su laboratorio
T4 DNA Ligase
Une dos cadenas de ADNbc con extremos cohesivos o romos utilizando los grupos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo de nucleótidos adyacentes.
M1801, M1804, M1794
Single Step (KRX) Competent Cells
Células E. coli ideales para la expresión de proteínas recombinantes, que ofrecen una transformación eficiente y una expresión regulada de proteínas.
L3002
BenchTop 1kb DNA Ladder
Trece fragmentos con extremos romos de 250-10.000pb premezclados con colorante de carga.
G7541
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Contacte con nosotros para hablar de las opciones personalizables de tamaño, formulación, concentración, envasado y formato de las enzimas para el clonaje y las enzimas modificadoras de Promega.
Introducción al clonaje y a los marcadores de peso molecular de ADN
El subclonaje es un procedimiento básico en biología molecular que se utiliza para trasladar insertos de un vector a otro con el objetivo de conseguir la funcionalidad deseada y para caracterizar una secuencia de ADN de interés.
Un método para lograr la transferencia de un fragmento de ADN utiliza enzimas de restricción para digerir tanto el fragmento como el vector de destino, que suele ser un plásmido. La confirmación de que la digestión se ha realizado con éxito se lleva a cabo comparando el tamaño esperado de las muestras digeridas con fragmentos marcadores de peso molecular de ADN. Esto se lleva a cabo pasando las muestras por geles de agarosa que permiten separar los fragmentos de ADN por tamaño. Después, se utiliza la ADN ligasa T4 para "pegar" el fragmento deseado en el plásmido digerido.
El siguiente paso es la transformación. La transformación de bacterias con plásmidos es importante porque las bacterias se utilizan como medio para almacenar y replicar plásmidos. Es más probable que las células de E. coli incorporen ADN externo si sus paredes celulares están alteradas para que el ADN pueda atravesarlas más fácilmente. A estas células se las denomina células competentes. La selección de las células que se han transformado con éxito se realiza mediante selección antibiótica para el plásmido de interés.
Existen muchas opciones para confirmar si la transferencia se ha realizado con éxito, como por ejemplo mediante la PCR, la digestión con enzimas de restricción o la secuenciación. Una vez confirmado, el vector recombinante puede utilizarse para diversas aplicaciones, como la expresión de proteínas o la transcripción de ARN.
