PCR Cloning
La clonación con vectores T, o clonación TA, es un método idóneo para clonar productos de PCR generados con la Taq ADN polimerasa. Los pGEM®-T Vectors son una opción habitual para la clonación general de productos PCR. Estos vectores están listos para ser utilizados en reacciones de ligación; se preparan cortando con una endonucleasa de restricción que crea un extremo romo y añadiendo una timidina (T) terminal a ambos extremos. Los extremos 3' T en el sitio de inserción mejoran en gran medida la eficacia de la ligación de un producto de PCR en el plásmido, al evitar la recircularización del vector y proporcionar un extremo compatible con los productos de PCR con extremos 5' A. Los sistemas pGEM®-T Easy Vector se suministran con células competentes incluidas.
El pTARGET™ Vector se utiliza para la clonación y expresión de productos de PCR en células de mamífero. A su vez, para la secuenciación de los insertos clonados en este vector, está disponible el pTARGET™ Sequencing Primer.
Filter By
Comprar todos los productos para la PCR de clonaje
Showing 3 of 3 Products
Introducción a la PCR de clonaje
Los productos PCR generados con una non-proofreading ADN polimerasa, que carece de actividad exonucleasa 3' a 5' como la Taq ADN polimerasa, quedan con un único nucleótido, la desoxiadenosina (A) independiente del molde en el extremo 3'. Este nucleótido permite la hibridación y la clonación con vectores que tienen una desoxitimidina (T) complementaria en el extremo 3'.
Los vectores-T son plásmidos lineales que han sido tratados para tener residuos T en los extremos y poder ser complementarios a los residuos A del producto PCR. Los fragmentos de PCR que contienen un residuo A pueden ligarse directamente a estos vectores plasmídicos con la acción de una ADN ligasa T4.
Los pGEM®-T y pGEM®-T Easy Vectors de alto número de copias, contienen los promotores de la ARN polimerasa T7 y SP6 en una región de clonación múltiple, dentro de la región que codifica al péptido α de la ß-galactosidasa, lo que permite la selección azul/blanca de los clones recombinantes.
Tanto el pGEM®-T Vector como el pGEM®-T Easy Vector contienen numerosos sitios de restricción dentro de la región de clonación múltiple. La región de clonación múltiple del pGEM®-T Easy Vector está rodeada de sitios de reconocimiento para las enzimas de restricción EcoRI, BstZI y NotI, lo que permite tres digestiones monoenzimáticas posibles para la liberación del inserto. La región de clonación del pGEM®-T Vector está rodeada de sitios de reconocimiento para la enzima BstZI. Otra opción podría ser realizar una doble digestión para liberar el inserto de cualquiera de los dos vectores.
