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Purificación de plásmidos

Ofrecemos kits de preparación de plásmidos en formato miniprep, midiprep y maxiprep, para la purificación de ADN plasmídico a partir de volúmenes pequeños, medianos y grandes de cultivos bacterianos.

Los PureYield™ Systems permiten purificar ADN plasmídico de alta calidad de forma rápida. El protocolo incluye un lavado que permite eliminar las endotoxinas, con el fin de mejorar el rendimiento de los plásmidos purificados en aplicaciones posteriores como la transfección y la transcripción/traducción in vitro.

Los Wizard® SV Systems son una solución flexible para la purificación de plásmidos por centrifugación o por vacío, tanto en formato de tubo, como en formato placa de 96 pocillos. Los Wizard MagneSil® Systems utilizan un método de purificación de plásmidos con base magnética, diseñado para la automatización en manipuladores de líquidos. 

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Fundamentos de la purificación de plásmidos

Los plásmidos son herramientas de investigación comunes que se utilizan en muchas aplicaciones, como la clonación, la transfección, las reacciones de transcripción/traducción sin células y la secuenciación del ADN. La mayoría de los sistemas de purificación de plásmidos lisan las células bacterianas mediante un método modificado de lisis alcalina, seguido de un paso de neutralización rápido, para volver a unir los plásmidos pero no el ADN genómico. A continuación, el plásmido se purifica mediante su unión a una columna. Las columnas suelen lavarse con una solución que contiene alcohol para eliminar los contaminantes, y a posteriori, el ADN plasmídico se eluye con un tampón adecuado. Este procedimiento de "unión, lavado y elución" se ha ido mejorando a lo largo de los años, para satisfacer las crecientes demandas de un protocolo sencillo y rápido, que proporcione un alto rendimiento de ADN plasmídico de gran pureza.

La endotoxina (lipopolisacárido o LPS) es un componente de la pared celular de todas las bacterias Gram-negativas. Es un potente estimulador del sistema inmunitario de los mamíferos in vivo, y puede disminuir la viabilidad de las células de tejidos en cultivo, e inhibir la eficiencia de la transfección in vitro. Para obtener la máxima consistencia y para transfectar una amplia gama de líneas celulares, es aconsejable utilizar ADN plasmídico que contenga la menor cantidad de endotoxina posible.