Expresión de proteínas

Los sistemas de expresión libre de células más utilizados proceden de reticulocitos de conejo, germen de trigo y E. coli. Existen dos tipos de sistemas de expresión libre de células basados en reticulocitos de conejo: Los sistemas de traducción y los sistemas de traducción y transcripción acopladas (TNT®). Ambos proporcionan los componentes macromoleculares necesarios para la traducción, como ribosomas, ARNt, aminoacil-ARNt sintetasas y factores de iniciación, elongación y terminación. La síntesis de proteínas puede realizarse en pocas horas utilizando plantillas de ARNm en los sistemas de traducción o plantillas de ADN (ADN plasmídico o fragmentos de PCR) en los sistemas de transcripción y traducción acoplados.

El sistema de ARN polimerasa T7 es el método más popular para producir proteínas en E. coli. En este sistema, un vector de expresión que contiene un gen de interés, clonado corriente abajo del promotor T7, se introduce en un hospedador de expresión T7. Los hospedadores de expresión T7, como las cepas DE3, tienen una copia cromosómica del gen de la ARN polimerasa del fago T7. Cuando se añade al cultivo un inductor como IPTG o ramnosa, la ARN polimerasa T7 se expresa y transcribe el gen de interés, seguido de la traducción de la proteína deseada por la maquinaria endógena de traducción de proteínas. Promega ofrece células competentes listas para usar para la expresión de proteínas recombinantes en E. coli.