Expresión de proteínas basada en células
Promega ofrece dos cepas de células competentes de E. coli modificadas para mejorar la eficiencia de la transformación y proporcionar una expresión regulada o inducible de proteínas recombinantes: BL21(DE3)pLysS y Single-Step (KRX) Competent Cells.
BL21(DE3)pLysS es un derivado de BL21 que tiene el gen de la ARN polimerasa T7 bajo el control del promotor lacUV5 (inducible por IPTG). Las células competentes de un solo paso (KRX) contienen una copia cromosómica de la ARN polimerasa T7 controlada por un promotor de ramnosa (rhaBAD, inducible por ramnosa). Los niveles de expresión de proteínas de fondo en las Single-Step (KRX) Competent Cells son significativamente inferiores a los de las cepas derivadas de BL21(DE3) y, por lo tanto, se recomiendan para la expresión de proteínas que son tóxicas para E. coli.
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¿Qué es la expresión de proteínas basada en células?
La expresión celular de proteínas permite alcanzar altos niveles de producción de proteínas recombinantes utilizando células procariotas o eucariotas. E. coli es un huésped común bien conocido por su sencilla manipulación genética y la producción de muchos tipos diferentes de proteínas. El método más popular para la expresión de proteínas recombinantes a partir de células E. coli utiliza un huésped de expresión T7 y un vector de expresión que contiene un promotor T7. El gen de interés se clona corriente abajo del promotor T7 y el vector de expresión se introduce en el huésped. Se añade un inductor, como ramnosa o IPTG, al cultivo para inducir el promotor T7. A continuación, la maquinaria endógena de traducción de proteínas de la célula huésped transcribe y traduce el gen de interés..
Los distintos promotores ofrecen diferentes grados de control sobre la expresión génica. El promotor de la ramnosa (rhaBAD) ofrece un control estricto de las proteínas expresadas a través de un promotor T7. Es ideal cuando los productos proteínicos recombinantes pueden ser perjudiciales para la célula.
