Vectores y kits para el clonaje
El clonaje de un fragmento específico de ADN en un vector como un plásmido es uno de los pasos fundamentales que permiten la caracterización adicional de esa secuencia. Vectores como la línea pGEM® contienen múltiples sitios de clonaje que permiten extraer fragmentos generados mediante digestión con enzimas de restricción específicas. Las secuencias creadas por PCR u otros métodos de clonaje TA relacionados pueden ligarse fácilmente a los pGEM® T-vectors. Para múltiples aplicaciones posteriores (por ejemplo, la expresión de proteínas), el exclusivo Flexi® Cloning System le permite transferir fragmentos a múltiples vectores.
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¿Qué es un vector para el clonaje?
Existen muchos tipos de vectores para el clonaje, pero los más utilizados son los plásmidos. Un vector plasmídico básico contiene unas características que permiten la inserción de un fragmento de ADN en el vector para su posterior manipulación o análisis. En el subclonaje clásico, el vector y la secuencia de interés se cortan con una enzima de restricción específica y el plásmido digerido resultante y la secuencia de ADN de interés se unen mediante una ligadura molecular utilizando una ADN ligasa T4.
El clonaje TA es una técnica que evita el uso de enzimas de restricción y, por tanto, es más fácil y rápida que el subclonaje tradicional. La técnica se basa en la capacidad de la adenina (A) y la timina (T) de diferentes fragmentos de ADN para hibridarse y, en presencia de la ADN ligasa T4, ligarse entre sí. Los productos de PCR suelen amplificarse utilizando la Taq ADN polimerasa, que añade de forma preferente una adenina al extremo 3' del producto de amplificación. En el clonaje TA, estos insertos amplificados por PCR se clonan en vectores “T” linealizados que tienen extremos 3' de timina complementarios.
