Ensayos de viabilidad celular y citotoxicidad
Ofrecemos una amplia línea de ensayos y reactivos para determinar la viabilidad celular y la citotoxicidad en cultivos celulares en monocapa, microtejidos 3D, células primarias, células madre, cultivos bacterianos y células infectadas por virus. Muchos de los ensayos de viabilidad celular y citotoxicidad de Promega pueden multiplexarse con ensayos para detectar la apoptosis o determinar el mecanismo de muerte celular, permitiendo comparar los datos de un pocillo a otro, de una placa a otra y de un día a otro.
Los ensayos de viabilidad celular y citotoxicidad se basan en métodos de detección colorimétricos, fluorométricos y bioluminiscentes. Los ensayos en células vivas en tiempo real se monitorizan a lo largo del tiempo y generan múltiples datos a partir de un mismo punto en el ensayo. Los ensayos de punto final pueden proporcionar un formato de ensayo sensible y de alto rendimiento para determinar la salud de las células.
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Introducción a los ensayos de viabilidad celular y citotoxicidad
Los ensayos de viabilidad y citotoxicidad celular miden los cambios celulares o metabólicos de las células viables y no viables. Estos ensayos pueden detectar cambios estructurales como la pérdida de integridad de la membrana al morir la célula o actividades fisiológicas y bioquímicas que indican la presencia de células vivas.
El ensayo de viabilidad celular de referencia y el más sensible, es el CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay, el cual mide el ATP intracelular. Los ensayos de ATP lisan la célula de forma rápida, aportan inhibidores de ATPasa y componentes para la reacción de la luciferasa. La generación de luz es proporcional al número de células viables.
Además, Promega ofrece ensayos de viabilidad colorimétricos, de fluorescencia y de bioluminiscencia basados en el potencial reductor de una célula viable. Entre ellos se encuentran los ensayos colorimétricos (CellTiter 96® AQueous One Solution), fluorescentes (CellTiter-Blue® Viability Assay) y bioluminiscentes (RealTime-Glo® MT Cell Viability Assay). El RealTime-Glo® MT Cell Viability Assay es un ensayo no lítico que monitoriza la viabilidad celular de forma continua a lo largo del tiempo basándose en el potencial reductor de la célula.
Los ensayos de citotoxicidad miden parámetros asociados a la pérdida de integridad de la membrana tras la muerte celular. Estos ensayos pueden detectar proteínas citosólicas que la célula no debería liberar, a menos que ésta haya perdido la integridad de la membrana y las proteínas se hayan filtrado hacia el exterior. La liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) es una forma aceptada para medir la muerte celular. Ésta puede ser detectada mediante el LDH-Glo® Assay. El CytoTox-Fluor® Assay emplea un sustrato peptídico fluorogénico que permite medir la actividad de la "proteasa de células muertas" liberada por las células que han perdido la integridad de la membrana. Por otro lado, los ensayos de citotoxicidad pueden detectar la capacidad de penetración de dyes impermeables en las células tras la pérdida de actividad de su membrana. CellTox™ Green es un dye fluorescente que se une al ADN tras la muerte celular generando una señal estable que puede ser medida en ensayos de citotoxicidad en tiempo real.
