Kits de purificación de proteínas
Estos prácticos kits y reactivos de purificación de proteínas manuales y automatizables incluyen productos para la purificación de proteínas marcadas por afinidad con His, GST, biotina o HaloTag®, y sistemas magnéticos para la purificación de anticuerpos basados en la unión a proteínas A o G. También ofrecemos accesorios para la purificación de proteínas, como el cóctel de inhibidores de proteasas y el reactivo de lisis celular.
La purificación por afinidad es un potente método para enriquecer y purificar una proteína recombinante a partir de un lisado celular. Las tags de afinidad se colocan en el extremo N o C de la proteína de interés. Las proteínas recombinantes marcadas se purifican a partir de lisados o sobrenadantes celulares mediante unión selectiva, seguida de lavado y elución de la proteína purificada. Después de la purificación, la proteína puede escindirse con una proteasa para eliminar la tag de afinidad.
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Conceptos básicos sobre kits de purificación de proteínas
Existen numerosas tags de afinidad que pueden utilizarse para la purificación de proteínas. Las tags de afinidad varían mucho en función del tamaño, la fuerza de unión y el efecto sobre la solubilidad y estabilidad de la proteína. Los kits de purificación de proteínas de Promega están disponibles para la purificación por afinidad utilizando His, GST, HaloTag y Streptavidin/Biotin.
La tag más utilizada para purificar proteínas recombinantes es la tag de polihistidina. La purificación de proteínas mediante tags His se basa en la afinidad de los residuos de histidina por el metal quelado inmovilizado, como el níquel, que permite la purificación selectiva de proteínas. Las tags His ofrecen varias ventajas para la purificación de proteínas. El pequeño tamaño de la tag His la hace menos inmunogénica que las tags más grandes. Ofrecemos HisLink™ Systems escalables para la purificación de proteínas marcadas con His o HQ a partir de lisados celulares.
El uso de la tags de afinidad glutatión-S-transferasa (GST) se basa en la fuerte afinidad de la GST por las matrices inmovilizadas cubiertas de glutatión. Las glutatión-S-transferasas son una familia de proteínas citosólicas multifuncionales que están presentes de forma endógena en los organismos eucariotas, pero que normalmente no se encuentran en las bacterias. Por ello, no se recomienda la purificación basada en GST para sistemas eucariotas (por ejemplo, insectos, mamíferos). Tras la captura y el lavado, la proteína marcada se eluye con glutatión soluble. Los MagneGST™ Protein Purification y Pull-Down Systems están diseñados para la purificación de proteínas marcadas con GST.
Para la purificación de proteínas, la tecnología HaloTag® es compatible con muchos sistemas de expresión de proteínas y puede aplicarse a proteínas expresadas en E. coli, células de mamífero y sistemas libres de células. La proteína HaloTag® es una buena tag de afinidad para la purificación y también una buena tag de solubilidad. La falta de un equivalente endógeno de la proteína HaloTag® en las células de mamíferos y en la mayoría de las células procariotas minimiza las posibilidades de interacciones inespecíficas. La combinación de captura covalente con una cinética de unión rápida supera las limitaciones basadas en el equilibrio asociadas a las tag de afinidad tradicionales y permite una captura eficaz incluso a niveles de expresión bajos.
El poder de la interacción estreptavidina-biotina se utiliza en numerosas aplicaciones, incluida la detección de diversas biomoléculas. La estreptavidina tiene una afinidad de unión muy alta con la biotina. Ofrecemos Magne® Streptavidin Beads para la purificación de anticuerpos biotinilados, así como fosfatasa alcalina de estreptavidina para la detección de proteínas biotiniladas, y el sistema de clonación PinPoint™ para la generación de proteínas de fusión biotiniladas.
