Purificación y concentración de ADN/ARN
Los productos PCR o el ADN procedente de las digestiones con enzimas de restricción, suelen purificarse de los componentes de las reacciones para eliminar cualquier nucleótido, cebador o pequeña molécula que pueda interferir en el rendimiento de las aplicaciones posteriores. Los productos enumerados a continuación ofrecen soluciones flexibles para purificar y concentrar fragmentos de ADN o ARN a partir de reacciones de PCR o de geles, o bien para concentrar ADN o ARN a partir de soluciones diluidas.
El Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up System extrae y purifica fragmentos de ADN a partir de geles de agarosa, o directamente de reacciones de PCR. Los ReliaPrep™ RNA and DNA Clean-Up and Concentration Systems pueden utilizarse para concentrar muestras diluidas mediante un protocolo sencillo y rápido, o bien para purificar ADN o ARN a partir de reacciones de amplificación y geles. El ADN purificado/concentrado puede utilizarse directamente en aplicaciones como la secuenciación, clonación, labeling, digestión con enzimas de restricción o la transcripción/traducción in vitro.
El Wizard® MagneSil® Sequencing Reaction Clean-up System es un método cómodo de base magnética, para la purificación de productos de reacciones de secuenciación, que puede ser fácilmente adaptado para aplicaciones de alto rendimiento.
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Introducción a la purificación y concentración de ADN/ARN
La purificación o concentración de fragmentos de ADN o de productos PCR implica la separación del ADN de los componentes de la reacción in vitro, o de los fragmentos de gel de agarosa. En muchos casos, tras una amplificación por PCR o una digestión con enzimas de restricción, los componentes de la reacción incluyen cebadores, proteínas y sales que pueden interferir con el rendimiento de los análisis posteriores.
La purificación de fragmentos de ADN puede mejorar la eficiencia de aplicaciones posteriores. Por ejemplo, los productos PCR no específicos o los dímeros de cebadores en una reacción de amplificación, pueden competir en la ligación del producto PCR deseado durante una posterior clonación de vectores T, lo que podría dar como resultado una baja tasa de clones positivos.
En la secuenciación Sanger, ciertos componentes de la reacción interfieren en la recopilación de datos, si no se eliminan antes de proceder a su análisis. Las sales de los tampones dan lugar a una migración electroforética anómala, y los terminadores marcados con colorantes no incorporados, además de otras especies relacionadas, interfieren en la señal de los productos de la secuenciación.
Al igual que otros sistemas de purificación de ADN y ARN, los productos diseñados para purificar fragmentos o concentrar ADN o ARN, suelen implicar la fijación del ácido nucleico en sílice o celulosa incorporada a membranas, resinas o perlas magnéticas, seguido de pasos de lavado y elución.
