Ensayos de estrés oxidativo
El estrés oxidativo, que consiste en un desequilibrio entre la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) y el sistema de defensas antioxidantes de las células, está asociado a enfermedades humanas y al envejecimiento.
Este grupo de productos incluye ensayos de estrés oxidativo basados en la bioluminiscencia para detectar el glutatión, detectar los cambios en las ERO o medir la relación entre el glutatión reducido y el oxidado como indicadores de salud celular. Estos ensayos, basados en una simple señal bioluminiscente, son fáciles de configurar y utilizar, y se pueden emplear en aplicaciones de screening de alto rendimiento.
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Introducción a los ensayos de estrés oxidativo
El estrés oxidativo se produce cuando hay una aumento en la producción de especies reactivas de oxígeno (ERO) o una disminución de la eficacia de las defensas antioxidantes celulares. Las células producen ERO como resultado de un aumento del metabolismo o por una respuesta al estrés. El glutatión, como antioxidante, se utiliza para reducir el daño de las ERO. Los ensayos que determinan el estrés oxidativo permiten medir los niveles de especies reactivas de oxígeno tóxicas o los niveles de antioxidantes celulares.
El glutatión es un antioxidante que se encuentra en las células eucariotas, casi siempre en su forma reducida (GSH). Una pequeña parte del glutatión celular se encuentra en estado oxidado (GSSG). El GSSG es un indicador excelente del estrés oxidativo en las células.
El GSH/GSSG-Glo™ Assay es un sistema basado en la luminiscencia que permite detectar y cuantificar el glutatión tanto en estado oxidado como reducido. Su estable luminiscencia se produce por la conversión de la luciferina-NT, una sonda de GSH, en luciferina por una enzima glutatión S-transferasa. Esta conversión a luciferina se acopla a una reacción de luciferasa firefly la cual produce una señal luminiscente proporcional a la cantidad de GSH presente.
Las especies reactivas de oxígeno (ERO) son moléculas químicamente reactivas que contienen oxígeno. Estas son beneficiosas para la célula como subproductos naturales del metabolismo y tienen funciones en la señalización celular, pero también pueden provocar daños celulares y estrés oxidativo. Una tasa de proliferación elevada está relacionada con un aumento de las ERO. Dado que varias ERO se convierten en H2O2 en la célula, y que el H2O2 es la ERO más longeva, un aumento de H2O2 puede reflejar un aumento general de los niveles de ERO celulares. El ROS-Glo™ Assay utiliza un sustrato que reacciona directamente con el H2O2 generando una señal luminiscente proporcional al nivel de H2O2 presente.
