Ensayos de apoptosis
Un ensayo de apoptosis detecta y cuantifica los eventos celulares asociados a la muerte celular programada, incluyendo la activación de caspasas, la exposición de fosfatidilserina (PS) en la superficie celular o la fragmentación del ADN.
Los ensayos de apoptosis de Promega incluyen los ensayos luminiscentes Caspase-Glo®, que detectan la actividad de las caspasas que participan en la vía intrínseca o extrínseca de la apoptosis. Los ensayos Caspase-Glo® 3/7, 8 y 9 son los ensayos de caspasas más sensibles disponibles.
El RealTime-Glo® Annexin V Apoptosis Assay es un ensayo luminiscente que detecta la exposición de la fosfatidilserina (PS) y monitoriza la apoptosis en tiempo real de forma continua en una placa de cultivo celular.
También ofrecemos ensayos TUNEL, anticuerpos de apoptosis, inhibidores y otros marcadores de apoptosis.
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Fundamentos de los ensayos de apoptosis
La apoptosis, o muerte celular programada, elimina las células dañadas, infectadas o innecesarias. La apoptosis se asocia a diversos cambios morfológicos, como el encogimiento celular, la condensación de la cromatina, la pérdida de la integridad de la membrana nuclear, el abombamiento de la membrana plasmática y la formación de cuerpos apoptóticos. Otro tipo de muerte celular es la necrosis, que se produce tras una lesión celular y está menos regulada que la apoptosis. Comprender si la muerte celular es resultado de la apoptosis es importante para entender las vías de desarrollo, el mecanismo de acción de moléculas pequeñas y grandes (biológicos) de fármacos, y las funciones relacionadas del sistema inmunitario.
Los ensayos de apoptosis suelen detectar eventos bioquímicos y celulares que indican la activación de una vía apoptótica. La activación de un efector (por ejemplo, la caspasa-3) da lugar a fenómenos apoptóticos comunes, como la exposición de la fosfatidilserina en la superficie externa de la membrana plasmática (que suele medirse mediante la unión a la anexina V), la escisión de las enzimas homeostáticas y de reparación celular (por ejemplo, la poli [ADP-ribosa] polimerasa [PARP], medida mediante técnicas de anticuerpos) y la fragmentación del ADN internucleosomal (que suele medirse mediante ensayos TUNEL). La activación de la caspasa-3 se considera el inicio de la muerte celular apoptótica. Los acontecimientos que se produzcan dependerán de la vía apoptótica activada.
Normalmente, es necesario más de un método para confirmar que la muerte celular se produce por apoptosis. Los marcadores de apoptosis, como la actividad de las caspasas, pueden expresarse de forma transitoria. Por ello, es fundamental comprender la cinética del proceso de muerte celular en su sistema modelo, para así poder determinar si la apoptosis es el principal mecanismo de muerte celular. Los ensayos con células vivas en tiempo real monitorizan los eventos apoptóticos a lo largo del tiempo. También se pueden utilizar múltiples métodos para evaluar el tiempo de los eventos.
